HIF-1α、VEGF在稽留流产绒毛中的表达及意义

姜艳艳 廖春燕：广东医学院附属厚街医院 广东东莞 523000
冯丽英：东莞市沙田医院 广东东莞 523000

HIF-1α、VEGF在稽留流产绒毛中的表达及意义

br> 姜艳艳 廖春燕 冯丽英
EXPRESSION AND SIGNIFICANCE OF HIF-1α, VEGF IN VILLI OF PATIENTS WITH MISSED ABORTION
JIANG Yanyan, LIAO Chunyan, FENG Liying

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  【摘 要】 目的 检测稽留流产绒毛中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及血管内皮生长因子 (VEGF)的表达及二者之间的相关性。方法 免疫组化SP法检测厚街医院稽留流产60例及正常早孕20例患者绒毛中HIF-1α、VEGF的表达。结果 HIF-1α及VEGF在稽留流产患者绒毛中的表达均明显低于正常早孕妇女绒毛中的表达,两组间表达水平有显著性差异(p<005)，HIF-1α与VEGF呈显著正相关（r=0706，p<005）。结论 HIF-1α、VEGF表达降低可能是导致稽留流产发生的重要因素。
  【关键词】 稽留流产,绒毛,缺氧诱导因子1a,血管内皮生长因子

  【Abstract】 Objective To detect the expression and correlation of hypoxia-inducing factor-1alpha (HIF-1α) and vascular endothelial growth factor (VEGF) in villi of patients with missed abortion. Methods Immunohistochemical SP analysis were performed to detect the expression of HIF-1α and VEGF in 60 patients of missed abortion and 20 patients of normal pregnancy in Houjie hospital. Results The expression of HIF-1 alpha and VEGF in villi of patients with missed abortion were significantly lower than the expression in normal pregnancy villi, and the expression levels between the two groups have significant difference (p<0.05). A significant positive correlation occured between HIF-1α and VEGF（r=0.706，p<0.05）. Conclusion The expression of HIF-1α and VEGF reduction may be the important factors that result in missed abortion.
     【Key words】 Missed abortion, Villus, HIF-1α, VEGF
     【Author′s address】 Affiliated Houjie Hospital of Guangdong Medical College, Dongguan, Guangdong, 523000,PRC
  doi:10.3969/j.issn.1671-332X.2015.02.008

  稽留流产指胚胎或胎儿已死亡且滞留宫腔内未能及时自然排出者。随着人们优生优育意识的提高，越来越多的早期胚胎停止发育的无症状孕妇被临床检出，并有增加趋势。稽留流产发生的原因众多，临床上只有极少数的患者能检测到较为明确的原因。近年来子宫－胎盘循环异常成为研究的热点，本研究旨在通过检测稽留流产绒毛中HIF-1α和VEGF的表达，探讨二者在稽留流产发生中的作用机制，为稽留流产的早期诊断及治疗提供理论依据。
1 资料与方法
1.1 研究对象
     选择东莞市厚街医院2014年1月至2014年10月停经<12周在我院确诊为稽留流产的患者60例作为实验组。根据停止发育周数大小分为<2周组和>2周组。患者年龄(257±58)岁，孕周(71±12)周，选取同期胚胎存活因意外妊娠要求行终止妊娠的20例正常早孕孕妇作为对照组，孕妇年龄(274±52)岁,孕周(63±11)周，两组患者的年龄、孕周比较差异均无统计学意义（p<005）。
1.2 标本采集
     清宫术后收集完整绒毛组织，用无菌生理盐水漂净血迹，10%甲醛固定液固定， 24~48小时后取出石蜡包埋，制成切片。
1.3 实验试剂
     兔抗人HIF-1α单克隆、鼠抗人VEGF SP试剂盒均购自中杉金桥生物技术有限公司。
1.4 结果判定
     以细胞浆或细胞核内出现明确的棕黄色颗粒为阳性细胞。每个切片随机选取不重叠 5 个高倍视野 (200 倍) ，用 MoticMed 数码医学图像分析系统分别测定每个视野阳性染色部位的光密度，取其平均值即得切片的平均光密度(OD) 值。
1.5 统计学处理
     实验数据应用SPSS 150软件进行统计分析,数据以（±s）表示，两组间比较采用两组独立样本的ｔ检验；采用Pearson相关分析法对HIF-1α和VEGF的表达进行相关性分析。检验水准α=0.05。
     2 结果
     HIF-1α主要表达于滋养细胞的细胞核和细胞质，VEGF则主要表达于滋养细胞的细胞质， HIF-1α及VEGF在稽留流产绒毛中的表达均明显低于正常早孕妇女绒毛中的表达,两组间表达水平有显著性差异(p<005),见表1。稽留流产患者中停止发育<2周组与>2周组HIF-1α与VEGF的表达量均无明显差异 (p>0.05),见表2。HIF-1α与VEGF呈显著正相关（r=0.706，p<0.05）。

表1 HIF-1α和VEGF的表达比较

(±s)

组别	例数 （n）	HIF-1α的表达	VEGF的表达
		OD值	p值	OD值	p值
实验组	60	119.95±11.36	<0.05	122.95±11.82	<0.05
对照组	20	145.83±12.07		148.49±14.27

表2 不同停止发育周数组中HIF-1α和VEGF的表达

 

组别	例数 （n）	HIF-1α的表达	VEGF的表达
		OD值	p值	OD值	p值
<2周组	27	120.95±10.47	>0.05	125.73±11.35	>0.05
>2周组	33	116.83±13.23		120.82±12.92

3 讨论
3.1 HIF-1α与稽留流产
     HIF-1是由 WANG等［1］于1992年在缺氧诱导的细胞核提取物中发现的一种异源二聚体转录因子, 由120 ku的α亚基和91~94 ku的β亚基组成, HIF-1α基因位于14号染色体(14q21 24)。HIF-1α的表达受多个途径诱导,对氧的浓度高度敏感，被称之为“缺氧基因表达的总开关”［2］。妊娠早期胚胎发育和胎盘发生是在相对缺氧的环境中进行的，妊娠10～12 周时绒毛外滋养细胞阻塞子宫螺旋动脉，阻止母体血液流向绒毛间隙，胎儿和胎盘发育处于缺氧环境中［3］。本研究结果显示正常早孕绒毛中HIF-1α表达较强，而稽留流产患者绒毛中呈低表达，两组间差异有统计学意义，提示HIF-1α参与胚胎正常生长发育，HIF-1α活性上调可提高细胞在低氧和局部缺血环境下的生存能力，相反 HIF-1表达降低使胚胎不能耐受低氧环境，使滋养细胞增殖，分化受到影响而导致胚胎停止发育。
3.2 VEGF与稽留流产
     血管内皮生长因子是一种血小板衍生生长因子，在胚胎种植着床部位人类胚胎植入与产生新生血管过程发挥重要作用［4］，是一种高效的促血管生成因子，是正常妊娠的决定性因素之一。在胎盘的形成及植入过程中，血管的生成对于成功妊娠起着非常关键的作用。本实验结果显示，正常早孕人工流产绒毛组织中存在 VEGF 阳性表达，且表达量高于稽留流产组，提示其与胚胎正常发育维持妊娠有关，VEGF 表达降低可能是导致稽留流产的原因。正常情况下，血管新生的正负调控因子处于平衡状态，是一个严格受控的过程，但在某些因素作用下，两者失衡导致妊娠过程中的血管发育异常，最终导致稽留流产。
     在缺氧条件下, HIF-1α不发生羟化, 可以进入到细胞核内, 与HIF-1β结合形成二聚体结构,结合低氧效应元件, 上调大量编码血管生成的蛋白基因的表达, 如 VEGF及其受体 Flk-1或 VEGFR2、PDGF和促血红细胞生长素，为血管新生提供必备的条件［5］。研究表明HIF-1α与VEGF可能共同促进了子宫内膜异位症的血管生成［6］。二者在肿瘤血管形成中也起重要作用。刘小娟等［7］的研究表明非小细胞肺癌介入治疗后HIF-1α和VEGF水平明显升高且呈正相关性,但其升高程度明显小于接受常规治疗的患者。蔡劲等［8］研究表明舌鳞癌中HIF-1α 与VEGF 表达呈明显正相关性（r＝0554，p＜001）。本研究结果显示稽留流产患者绒毛中HIF-1α与VEGF的表达均明显低于正常早孕妇女，HIF-1α与VEGF呈显著正相关（r=0.706，p<0.05）。提示在稽留流产发病过程中二者呈协同作用，二者表达降低促使了稽留流产的发生，与孙澜栩等［9］研究结果一致。
     总之，HIF-VEGF信号通路对维持正常妊娠有一定作用。当信号通路发生异常时将导致稽留流产，这为稽留流产的早期诊断及治疗提供理论依据。

参考文献
［1］ WANG GL, SEMENZA GL. General involvement of hypoxia-inducible factor 1 in transcriptional response to hypoxia［J］. Proc Natl Acad Sci USA,1993,90(9):4304-4308.
［2］ SEMENZA GL. Hydroxylation of HIF-1: oxygen sensing at the molecular level［J］. Physiology (Bethesda),2004,19:176-182.
［3］ MOSLEMI ZADEH N,NAGHSHVAR F,PEYVANDI S,et al.PP13 and PAPP-A in the First and Second Trimesters: Predictive Factors for Preeclampsia ? ［J］.ISRN Obstet Gynecol,2012,2012: 263871.
［4］ PLAISIER M,DENNERT I,ROST E,et al. Decidual vascularization and the expression of angiogenic growth factors and proteases in first trimester spontaneous abortions［J］. Hum Reprod,2009,24 (1):185-197.
［5］ AMINA AQ, ALEKSANDER SP. A computational model of intracellular oxygen sensing by hypoxia-inducible factor HIF1 alpha［J］. J Cell Sci,2006, 119 (16): 3467-3480.
［6］ 任 旭,何援利.缺氧诱导因子-1α的表达与子宫内膜异位症血管生成的关系［J］.现代医院,2012,12(8):17-19. 
［7］ 刘小娟,张妙严,赵艾君,等.非小细胞肺癌介入治疗前后HIF-1α和VEGF水平的动态变化及相关性研究［J］.中国医药导报,2013,10(3):45-46.
［8］ 蔡 劲,任大宏,杨 静,等.舌鳞癌组织中HIF-1α和VEGF表达及与肿瘤血管生成的关系［J］.实用医学杂志,2013,29(8):1215-1218.
［9］ 孙澜栩,黄学惠,黄 燕,等. 稽留流产绒毛中 HIF-1a VEGF 和 PLGF 的表达及意义［J］.现代妇产科进展,2013,22(5): 367-369.