Rh(D)阴性冰冻红细胞质量及临床分析

熊少欢 侯满意 李婉仪 朱金女：广州血液中心花都区血站 广东广州 510800

Rh(D)阴性冰冻红细胞质量及临床分析


熊少欢 侯满意 李婉仪 朱金女
THE QUALITY AND CLINICAL ANALYSIS OF RH(D) NEGATIVE FROZEN RED CELLS
XIONG Shaohuan, HOU Manyi, LI Wanyi, et al

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  【摘 要】 目的 对ACP-215全自动血细胞处理仪制备的冰冻解冻去甘油红细胞进行质量分析。方法 使用ACP-215全自动血细胞处理仪对33袋Rh(D)阴性红细胞进行甘油化和复苏洗涤，检测红细胞回收率、甘油残留量、上清游离血红蛋白、白细胞残留量、体外溶血试验、无菌试验等指标，并分析其临床应用疗效。结果 ①冰冻解冻去甘油红细胞平均红细胞回收率为（85.2±3.12）%，上清游离血红蛋白浓度为（051±013）g/L，体外溶血试验为（130±20）%，甘油残留量为（351±101）g/L，白细胞残留量为(044±031)%,均符合《全血及成分血质量要求》。②临床输注Rh（D）阴性冰冻解冻去甘油红细胞前后Hb、 Hct结果有显著性差异（P＜005），疗效明显；TB、 DB、 UOB结果无显著性差异（P>005）。结论 使用ACP-215全自动血细胞处理仪制备冰冻解冻去甘油红细胞，操作简便，快速，产品质量高，能有效满足Rh(D)阴性血型患者的用血需求，为挽救患者生命争取宝贵的时间。
  【关键词】 Rh(D)阴性红细胞, 制备,质量分析,临床疗效
  doi:10.3969/j.issn.1671-332X.2015.11.025 

  ABO血型是临床输血中最重要的血型，而Rh血型则是人类第二大血型系统，其临床意义仅次于ABO血型系统。我国汉族人群Rh(D)阴性比例约占0.2％~0.5％［1］,因此稀有血型患者紧急用血经常难以满足，其生命受到严重威胁。为了提高Rh(D)阴性血液的保存技术，1972年Meryman等使用复方甘油配方深低温保存红细胞，解冻后利用不同浓度梯度的氯化钠溶液洗涤红细胞去除甘油获得成功［2］。我国自20世纪70年代末期也开展了红细胞深低温保存的研究并应用于临床输注获得成功。我站现使用ACP-215全自动血细胞处理仪进行冰冻解冻去甘油红细胞的制备，目前主要用于稀有血型血液的长期保存，以便应急使用［3］。现汇报如下：
     1 材料与设备
1.1 血液来源
     按《献血者健康检查要求》［4］采集血液，并经本站检验科确定为Rh（D）阴性，经检测血液合格，在2~6 ℃冰箱保存6 d以内的悬浮红细胞。
1.2 病例来源
     2013年6月~2015年6月我血站共制备冰冻解冻去甘油红细胞33袋，并查阅33袋红细胞临床应用后的病历，对相关输血资料和数据进行统计分析。
1.3 设备和耗材
     ACP-215型全自动红细胞处理仪、一次性使用血液甘油化耗材(225型，美国血液技术公司)、一次性使用血液去甘油化耗材(235型，美国血液技术公司)、57.1％复方甘油溶液(伯德桑特输采血器材科技开发公司)、质量浓度为90 g/L的浓氯化钠溶液(伯德桑特输采血器材科技开发公司)、质量浓度为9 g/L的氯化钠溶液(南格尔生物医学股份有限公司)、800 mL转移袋(南格尔生物医学股份有限公司)、无菌接管机(费森尢斯)、-80 ℃低温冰箱(三洋MDF-382E(N))、离心机(KR-4I)、电热恒温振荡水槽 (森信实验仪器有限公司DKZ一450N)、封管热合机(森通SE250)、Kx-21全自动血细胞分析仪、CS-600A全自动生化分析仪、全自动细菌培养仪。
2 制备方法
2.1 细胞甘油化
2.1.1 分上清 将悬浮红细胞用无菌接管机与200 ml空袋连接，去除所有上清，制成浓缩红细胞。摇匀后将红细胞转移至800 ml空袋，并用无菌接管机连至225型加甘油耗材。
2.1.2 加注甘油并去上清 通过ACP-215全自动血细胞处理仪对血液进行自动甘油化后去上清，即得冰冻红细胞。
2.1.3 冰冻保存 甘油化的红细胞放入特制防护纸盒内，置于-80 ℃低温冰箱保存，保存期为10年。
2.2 冰冻解冻去甘油红细胞制备
2.2.1 复苏解冻 将冰冻红细胞置于已预温为38 ℃的振荡水浴箱中解冻， 5~10 min内融化完毕，称重，根据其容量设置添加浓氯化钠溶液。
2.2.2 甘油洗涤 将235型去甘油耗材通过无菌接管机与冰冻红细胞连接。根据所制备红细胞的容量设定技术参数，确定无误后进行去甘油洗涤，即制得冰冻解冻去甘油红细胞。
2.3 红细胞的质量检测
     冰冻红细胞解冻后按相关要求留取照质控标本。采用Kx-21全自动血细胞分析仪检测红细胞的回收率、白细胞残留量；采用邻联甲苯胺法检测游离血红蛋白与体外溶血试验；采用过碘酸钠法测定甘油的残余量；采用全自动细菌培养仪进行细菌培养。
2.4 患者疗效检测
     使用Kx-21全自动血细胞分析仪作Hb和Hct的测定；使用全自动生化分析仪作血清总胆红素（TB）和直接胆红素（DB）测定；使用尿液分析仪作尿潜血（UOB）测定。
2.5 统计方法
     使用SPSS 16.0统计软件进行统计分析，P＜005为差异有统计学意义。
3 结果
3.1 冰冻解冻去甘油红细胞的质量检测结果
     采用ACP215全自动细胞处理仪制备冰冻解冻去甘油红细胞的质量检测结果见表1。从各检测数据结果可以看到，其各项质控指标均达到GB18469-2012《全血及成分血质量要求》［5］。

表1 ACP215全自动细胞处理仪制备冰冻解冻
去甘油红细胞的质量检测结果

（n=33）

	检测结果	标准规定
红细胞回收率/％	85.2±3.12	≥80
甘油残留量/(g·L-1)	3.51±1.01	≤10
上清游离血红蛋白/(g·L-1)	0.51±0.13	≤1
体外溶血试验/％	13.0±2.0	＜50
白细胞残留量/％	0.44±0.31	≤1
无菌试验	无菌生长	无菌生长

3.2 临床输注Rh（D）阴性冰冻解冻去甘油红细胞前后平均疗效指标比较
     通过对33袋红细胞的临床应用前后的Hb、 Hct、 TB、 DB、 UOB五项指标的比较，发现Hb、 Hct输注前后结果有显著性差异（P＜005），疗效明显；TB、 DB、 UOB输注前后结果无显著性差异（P＞005）。具体见表2。

表2 临床输注Rh（D）阴性冰冻解冻去甘油红细胞前后平均疗效指标

（n=33）

	Hb/（g·L-1）	Hct/％	TB/（mol·L-1）	DB/（mol·L-1）	UOB
输注前	72±0.51	27.5±2.1	15.6±1.3	6.1±0.9	阴性
输注后	106±0.32	35±1.8	15.4±1.9	6.2±0.8	阴性

4 讨论
     Rh血型系统在临床输血中的重要性仅次于ABO血型系统，作为人类第二大血型系统的Rh（D）阴性血型的血液需求量也在逐年增加［6］。目前，冰冻解冻去甘油红细胞主要用于：Rh（D）阴性患者输血及自身输血、ABO亚型、孟买血型患者等特殊患者的自身输血［7］。
     从表1看，使用ACP-215全自动血细胞处理仪制备的冰冻解冻去甘油红细胞，红细胞回收率（852±312）%、甘油残留量（351±101） g/L、上清游离血红蛋白（051±013） g/L、体外溶血试验（130±20）%、白细胞残留量（044±031）%、无菌试验为无菌生长，其质量均符合国家标准要求。在低温冷冻的条件下，由于红细胞的代谢活动几乎停止而处于休眠状态，使红细胞能够长期保存［8］，且经过洗涤后的生理形态及生化特征均与液体保存的红细胞相似，是长期储存红细胞的有效方法，也是军队及地方医疗机构应对突发事件时血液保障的重要手段［9］。
     从表2看，临床输注Rh(D)阴性冰冻解冻去甘油红细胞前，Hb与Hct分别为（72±051）g/L、（275±21）%，输注后分别为（106±032）g/L、（35±18）%，输注前后结果有显著性差异（P＜005），能达到输注悬浮红细胞的疗效（输注1U的红细胞，患者Hb可提高5g/L）。患者Hb及Hct恢复正常，而TB、DB及UOB与输注前没明显变化，说明冰冻解冻去甘油红细胞输注后未发生溶血等输血不良反应。此外，冰冻红细胞因其所含白细胞和血浆成分极少，可能会比在输入以液体状态保存的红细胞时发生输血相关急性肺损伤概率要小［10］，提高了输血的安全性。
     冰冻保存红细胞是借助冷冻剂（甘油）低温保存红细胞，从而减少其代谢，达到延长红细胞保存寿命的一种方法，也是目前唯一能够使红细胞保存时间最长的方法［11］。使用ACP-215全自动血细胞处理仪制备冰冻解冻去甘油红细胞，操作简便，快速，产品质量高，安全性大，能有效解决Rh(D)阴性血型患者的用血需求，为挽救患者生命争取宝贵的时间，具有广泛的应用前景。

参考文献
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［2］ 蔡玉旭,张雅清.海南地区无偿献血人群ABO、Rh血型调查［J］.中国输血杂志,2012,25(7):683-684.
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［6］ 梁世艳,张支凤,李华领.Rh(D)阴性冰冻红细胞库的建立及临床应用［J］.临床实践,2012,30(22):134-135.
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［11］ 付 丽.冰冻解冻去甘油红细胞的手工密闭式制备方法的研究［J］.中国保健营养(中旬刊),2013(12):87.